El método de tinción de Gram es una de las técnicas que se emplea con más frecuencia para detectar rápidamente el tipo de bacteria en una infección bacteriana, incluyendo la neumonía. (López-Jácome y cols., 2014; Rodriguez y Arenas, 2018)
La finalidad de esta técnica es realizar una tinción para diferenciar a las bacterias en dos grandes grupos,en donde las bacterias Gram positivas son aquellas que retienen la tinción azul-violeta, y se denomina bacterias Gram negativas a las que se decoloran y después se tiñeron con safranina, esto se debe a la estructura de las paredes celulares de ambos tipos de bacterias. (Rodríguez & Arenas, 2018)
Además de diferenciar a las bacterias por su coloración al gram positivo y negativo, también es útil para observar la morfología de la bacteria. (López-Jácome y cols., 2014)
En el caso de haemophilus influenzae, los resultados de la tinción es un gram negativo, es decir que aparezca en color rojo, sin embargo este patógeno presenta una morfología pleomórfica por lo que lo observaremos de las siguientes dos maneras, en forma de cocobacilo o bacilo. (Koneman, 2008)
Procedimiento
Realizar un extendido bacteriano en un portaobjetos con la muestra problema o con la cepa sospechosa tomada del medio primario.
Fijar el portaobjetos con calor utilizando un mechero bunsen.
Preparar un riel en donde se colocaran los portaobjetos.
Colocar el portaobjetos en el riel, agregar el colorante primario cristal-violeta y dejarlo reaccionar por 1 minuto y lavar con agua destilada con ayuda de una piseta.
Agregar en el portaobjetos el mordiente yodo lugol y dejar reaccionar durante 1 minuto después inclinar el portaobjetos y lavar con agua destilada.
Añadir en el portaobjetos el decolorante etanol al 96% durante el tiempo necesario, posteriormente inclinar el portaobjetos y lavar con agua destilada.
Adicionar el colorante secundario safranina y dejar reaccionar durante 1 minuto, enseguida inclinar el portaobjetos y lavar con agua destilada.
Dejar secar el portaobjetos teñido y observar en el microscopio a 100x utilizando aceite de inmersión.
Registrar las observaciones de morfología, coloración y cantidad de las bacterias.
(Rodríguez & Arenas, 2018)
En el video que se presenta a continuación, se observa de una manera más gráfica , el proceso de la tinción de gram, es importante realizarla adecuadamente ya que es uno de los primero puntos de partida para la identificación y una mala tinción puede provocar la presencia de bacterias gram variables.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
Koneman, E., Stephen ,D., Procop, G. & William, J. (2008). Capítulo 9. Otros bacilos gramnegativos con requerimientos nutricionales especiales. (6.a ed.) Koneman. Diagnóstico microbiológico: Texto y atlas (pp. 407-430). Editorial Médica Panamericana
López-Jácome, L., Hernández-Durán, M. & Colín-Castro, C. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad, 3(1), 10-18. https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
Rodríguez, P. & Arenas, R. (2018). Hans Christian Gram y su tinción. Dermatología Cosmética, Médica y Quirúrgica, 16(2). https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2018/dcm182n.pdf
Shutterstock. (2022). Cocobacilos y Bacillus. Morfología bacteriana [Fotografía]. Recuperado el 2 de septiembre de 2022 de https://www.shutterstock.com/es/image-vector/set-basic-shapes-arrangements-bacteria-microbiology-1706947180
Shutterstock. (2022). Tinción de gram de Haemophilus influenzae.. [Fotografía]. Recuperado el 2 de septiembre de 2022 de https://www.shutterstock.com/es/image-illustration/haemophilus-influenzae-bacteria-3d-illustration-gramnegative-595947080
Universidad de Navarra. (2020),. Demostración de una tinción de Gram por un doctorando de la Universidad de Navarra [Vídeo]. YouTube. Recuperado el 2 de septiembre de 2022 de: https://www.youtube.com/watch?v=nqzDzuwOvXo
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