Las placas cuádruples son otra herramienta de suma importancia en la identificación de Hemophilus influenzae, este suele ser más caro que el método de tiras de papel o discos pero presenta una ventaja para analizar la Beta hemolisis (transparente) en sangre de caballo y ayuda a diferenciar a H. haemolyticus de H. influenzae. Las placas Quad ID están divididas en cuatro compartimentos, un cuadrante contiene solo hemina (factor X), y el segundo cuadrante incluye medio que contiene solamente NAD (factor V), el tercer cuadrante contiene un medio que incluye tanto hemina como NAD (factor X, V) y el cuarto cuadrante contiene base de agar sangre con 5% de sangre de caballo o agar caldo infusión de corazón para detectar beta hemolisis y poder diferenciar H. haemolyticus de H. influenzae. Debemos de recordar que el acomodo de los cuadrantes puede variar dependiendo de la casa comercial.
Proceso de prueba de requerimiento de factor de crecimiento usando placas Haemophilus ID Quad
Inoculación
Lo primero es inocular las placas Quad ID pero para esto debemos primero de tener un subcultivo purificado en el que se inocula una colonia aislada , joven, pura y del que tengamos alta sospecha de H. influenzae este inoculo puede ser en un caldo de triptona soya o en su defecto un agar chocolate, en caso de ser en un caldo de triptona soya este se dejara durante aproximadamente 4 horas en microaerófila de CO2 hasta observar una suspensión lechosa clara equivalente a 0,5 % en la escala de McFarland y en caso de un medio solido deberemos de tomar una colonia de y pasarla a un tuvo con agua destilada suspendiendo hasta crear la misma concentración anteriormente mencionada.
Con un asa bacteriológica, estríe una asada de esta suspensión en cada cuadrante de la placa, primero en el cuadrante de V y por último en el cuadrante de la sangre. Estríe el cuadrante entero, comenzando en la periferia y continuando hacia el centro de la placa. Puncione el agar sangre para detectar hemólisis débil.
Incubación
Rotule con los datos del paciente e invierta la placa para incubar en una atmósfera de CO2 (en un frasco con una vela o en una incubadora de CO2 ) durante 18–24 horas a 35°C.
Reporte de resultados
Examine la sección de la sangre para la hemólisis y las otras secciones para el crecimiento después de la incubación.
H. influenzae muestra crecimiento típico en el cuadrante XV y en el cuadrante de sangre (de caballo) sin hemólisis. Si el crecimiento fuerte ocurre en uno de los cuadrantes X o V además del XV, el microorganismo probablemente sea otra especie de Haemophilus. Si el crecimiento ocurre en todos los cuadrantes, el cultivo probablemente no sea una especie de Haemophilus y se trate de contaminación. (Nota: en algunas ocasiones H. influenzae puede mostrar pequeño crecimiento en el cuadrante de factor V). Lea y registre los resultados.
Figura . Patrón de crecimiento de H. influenzae en una placa cuádruple de Haemophilus ID
En seguida se agrega una tabla en la que se muestran las especies de Haemophilus y sus requerimientos.
Bibliografías:
Murray, P. R., E. J. Baron, J. H. Jorgensen, M. L. Landry, and M. A. Pfaller (ed.).
2007. Manual of Clinical Microbiology, 9th ed, vol. ASM Press, Washington, D. C
Que interesante
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